Metabolism and gene polymorphisms of the folate pathway in Brazilian women with history of recurrent abortion / Metabolismo e polimorfismos gênicos da via do folato em mulheres brasileiras com história de aborto recorrente

PURPOSE: To investigate the association between polymorphisms in genes that encode enzymes involved in folate- and vitamin B12-dependent homocysteine metabolism and recurrent spontaneous abortion (RSA). METHODS: We investigated the C677T and A1298C polymorphisms of the methylenetetrahydrofalate reductase gene (MTHFR), the A2756G polymorphism of the methionine synthase gene (MS) and the 844ins68 insertion of the cystathionine beta synthetase gene (CBS). The PCR technique followed by RFLP was used to assess the polymorphisms; the serum levels of homocysteine, vitamin B12 and folate were investigated by chemiluminescence. The EPI Info Software version 6.04 was used for statistical analysis. Parametric variables were compared by Student's t-test and nonparametric variables by the Wilcoxon rank sum test. RESULTS: The frequencies of gene polymorphisms in 89 women with a history of idiopathic recurrent miscarriage and 150 controls were 19.1 and 19.6% for the C677T, insertion, 20.8 and 26% for the A1298C insertion, 14.2 and 21.9% for the A2756G insertion, and 16.4 and 18% for the 844ins68 insertion, respectively. There were no significant differences between case and control groups in any of the gene polymorphisms investigated. However, the frequency of the 844ins68 insertion in the CBS gene was higher among women with a history of loss during the third trimester of pregnancy (p=0.003). Serum homocysteine, vitamin B12 and folate levels id not differ between the polymorphisms studied in the case and control groups. However, linear regression analysis showed a dependence of serum folate levels on the maintenance of tHcy levels. CONCLUSION: The investigated gene polymorphisms and serum homocysteine, vitamin B12 and folate levels were not associated with idiopathic recurrent miscarriage in the present study. Further investigations are needed in order to confirm the role of the CBS 844ins68 insertion in recurrent miscarriage. .

OBJETIVO: Investigar a associação entre polimorfismos nos genes que codificam enzimas envolvidas no metabolismo da homocisteína dependente de folato e vitamina B12 e aborto espontâneo recorrente. MÉTODOS: Investigamos os polimorfismos C677T e A1298C no gene methilenotetrahidrofalato redutase (MTHFR); o polimorfismo A2756G no gene metionina sintase (MS) e a inserção 844ins68 no gene da cistationina beta-sintetase (CBS). A técnica de PCR seguido por RFLP foi utilizada para investigar os polimorfismos. Os níveis séricos de homocisteína, vitamina B12 e de folato foram investigados pela técnica de quimioluminescência. O Software Epi Info versão 6.04 foi utilizado para realizar a análise estatística. As variáveis paramétricas foram comparadas pelo teste t de Student e as variáveis não paramétricas pelo teste de Wilcoxon rank sum. RESULTADOS: As frequências dos polimorfismos gênicos em 89 mulheres com história de aborto recorrente idiopático e 150 controles foram de 19,1 e 19,6% para o C677T; 20,8 e 26% para o A1298C; 14,2 e 21,9% para o A2756G e 16,4 e 18% para a inserção 844ins68, respectivamente. Não houve diferenças significantes entre os grupos caso e controle em todos os polimorfismos dos genes investigados. No entanto, a frequência da inserção 844ins68 no gene CBS foi maior entre mulher com histórico de perdas no terceiro trimestre da gravidez p=0.003). Os níveis de homocisteína, vitamina B12 e folato séricos não foram diferentes entre os polimorfismos estudados nos grupos casos e controles. No entanto, a análise de regressão linear mostrou dependência dos níveis séricos de folato na manutenção dos níveis de homocisteína. CONCLUSÃO: Os polimorfismos gênicos investigados, assim como homocisteína, vitamina B12 e os níveis séricos de folato não foram associados com abortos recorrentes idiopático no presente estudo. Novas investigações devem ser realizados a fim de confirmar o papel da inserção 844ins68-CBS nos abortos recorrentes. .

Sickle cell disease retinopathy: characterization among pediatric and teenage patients from northeastern Brazil

Objective: The aim of the present study was to characterize sickle cell disease retinopathy in children and teenagers from Bahia, the state in northeastern Brazil with the highest incidence and prevalence of sickle cell disease. Methods: A group of 51 sickle cell disease patients (36 hemoglobin SS and 15 hemoglobin SC) with ages ranging from 4 to 18 years was studied. Ophthalmological examinations were performed in all patients. Moreover, a fluorescein angiography was also performed in over 10-year-old patients. Results: The most common ocular lesions were vascular tortuosity, which was found in nine (25%) hemoglobin SS patients, and black sunburst, in three (20%) hemoglobin SC patients. Peripheral arterial closure was observed in five (13.9%) hemoglobin SS patients and in three (13.3%) hemoglobin SC patients. Arteriovenous anastomoses were present in six (16.5%) hemoglobin SS patients and six (37.5%) hemoglobin SC patients. Neovascularization was not identified in any of the patients. Conclusions: This study supports the use of early ophthalmological examinations in young sickle cell disease patients to prevent the progression of retinopathy to severe disease and further blindness...

Chromosomal abnormalities in couples with recurrent first trimester abortions / Alterações cromossômicas em casais com aborto recorrente de primeiro trimestre

PURPOSE: To investigate the prevalence of chromosomal abnormalities in couples with two or more recurrent first trimester miscarriages of unknown cause. METHODS: The study was conducted on 151 women and 94 partners who had an obstetrical history of two or more consecutive first trimester abortions (1-12 weeks of gestation). The controls were 100 healthy women without a history of pregnancy loss. Chromosomal analysis was performed on peripheral blood lymphocytes cultured for 72 hours, using Trypsin-Giemsa (GTG) banding. In all cases, at least 30 metaphases were analyzed and 2 karyotypes were prepared, using light microscopy. The statistical analysis was performed using the Student t-test for normally distributed data and the Mann-Whitney test for non-parametric data. The Kruskal-Wallis test or Analysis of Variance was used to compare the mean values between three or more groups. The software used was Statistical Package for the Social Sciences (SPSS), version 17.0. RESULTS: The frequency of chromosomal abnormalities in women with recurrent miscarriages was 7.3%, including 4.7% with X-chromosome mosaicism, 2% with reciprocal translocations and 0.6% with Robertsonian translocations. A total of 2.1% of the partners of women with recurrent miscarriages had chromosomal abnormalities, including 1% with X-chromosome mosaicism and 1% with inversions. Among the controls, 1% had mosaicism. CONCLUSION: An association between chromosomal abnormalities and recurrent miscarriage in the first trimester of pregnancy (OR=7.7; 95%CI 1.2--170.5) was observed in the present study. Etiologic identification of genetic factors represents important clinical information for genetic counseling and orientation of the couple about the risk for future pregnancies and decreases the number of investigations needed to elucidate the possible causes of miscarriages. .

OBJETIVO: Determinar a prevalência de alterações cromossômicas em casais com dois ou mais abortos recorrentes do primeiro trimestre, sem causa definida. MÉTODOS: Foram incluídas 151 mulheres e 94 parceiros com história obstétrica de 2 ou mais abortos consecutivos de 1º trimestre (1-12 semanas de gestação). Os controles foram 100 mulheres saudáveis, sem histórico de perda da gravidez. A análise cromossômica foi realizada em linfócitos de sangue periférico, cultivados 72 horas e tratados com a técnica Tripsina-Giemsa (GTG banda). Em todos os casos, foram analisadas 30 metáfases e montados 2 cariótipos, sendo utilizada microscopia de luz. A análise estatística foi realizada por meio do teste t de Student para dados com distribuição normal e o teste Mann-Whitney para os dados não paramétricos. Foi usado o teste de Kruskal-Wallis ou Análise de Variância para comparação dos valores médios entre três ou mais grupos. O software utilizado foi o Statistical Package for the Social Sciences (SPSS), versão 17.0. RESULTADOS: A frequência de alterações cromossômicas das mulheres com aborto recorrente foi de 7,3%, incluindo 4,7% com mosaicismo do cromossomo X, 2% com translocações recíprocas e 0,6% com translocações Robertsonianas. No total, 2,1% dos parceiros das mulheres com abortos recorrentes tinham anormalidades cromossômicas, sendo 1% com mosaicismo do cromossomo X e 1% com inversões. Entre os controles, 1% apresentou mosaicismo. CONCLUSÃO: No presente estudo, foi observada associação entre alterações cromossômicas e aborto recorrente no primeiro trimestre da gestação (OR=7,7; IC95% 1,2-170,5). A identificação etiológica de fatores genéticos é uma informação ...

Ocular lesions in sickle cell disease patients from Bahia, Brazil / Lesões oculares em pacientes com doença falciforme da Bahia, Brasil

OBJECTIVE: The present study aims to describe ocular alterations in sickle cell disease patients in Bahia, a Northeast state, with the highest prevalence of the disease in Brazil. METHODS: We carried out a cross-sectional study in a group of 146 (292 eyes) sickle cell disease patients (90 HBSS and 56 HBSC). Ophthalmologic examination including indirect binocular ophthalmoscopy was performed. Examination was completed by fluorescein angiography to detect retinal lesions. RESULTS: The most frequent ocular lesions identified were "vascular tortuosity" and "black sunburst". Proliferative retinopathy was found in 22 (12.2 percent) eyes of HBSS patients and 25 (22.3 percent) eyes of HBSC patients (OR=2.06; CI95 percent: 1.5-4.06, p=0.022); Its frequency was higher among HBSS patients aged 20-39 years, while in HBSC patients, it peaked after 40 years (35.7 percent and 42.8 percent) and dropped sharply afterwards. CONCLUSION: Proliferative retinopathy was described as early as 10 years of age in both patients groups. Proliferative sickle retinopathy can result in blindness and the knowledge of the most prevalent ocular alterations and age risk will be important to establish a protocol of ophthalmologic follow-up, in order to prevent a severe visual loss and increase patient's life quality.

OBJETIVO: O presente estudo teve como objetivo descrever as alterações oculares em pacientes portadores de doença falciforme, na Bahia, um estado do Nordeste, que tem a maior prevalência da doença no Brasil. MÉTODOS: Nós conduzimos um estudo de corte transversal em um grupo de 146 (292 olhos) pacientes com Doença Falciforme (90 HBSS e 56 HBSC). Para exame oftalmológico foi realizada oftalmoscopia binocular indireta complementada pela retinografia fluorescente para detecção de lesões retinianas decorrentes da Doença Falciforme. RESULTADOS: As lesões mais frequentemente encontradas foram o aumento da tortuosidade vascular e "black sumburst" Retinopatia proliferativa foi encontrada em 22 (12,2 por cento) olhos de pacientes HBSS e 25 (22,3 por cento) olhos de pacientes HBSC (OR=2.06; CI95 por cento: 1.5-4.06, p=0. 022); essa frequência foi maior entre os pacientes HBSS com idade entre 20 - 39 anos, enquanto que nos pacientes HBSC foi maior nos acima de 40 anos (35.7 por cento e 42.8 por cento), decaindo abruptamente após essa idade. CONCLUSÃO: Retinopatia proliferativa foi descrita por volta dos dez anos de idade em ambos os grupos. A prevalência da retinopatia falciforme proliferativa pode resultar em cegueira e o conhecimento das alterações oculares mais prevalentes e idade de risco destas em pacientes com Doença Falciforme será importante para estabelecer um protocolo de acompanhamento oftalmológico, para prevenir um dano visual clinicamente grave, aumentando a qualidade de vida destes pacientes.

Clinical and molecular characteristics of sickle cell anemia in the northeast of Brazil

Beta S-globin gene (âS-globin) haplotypes, markers for severe sickle cell anemia (SCA), and the alpha-thalassemia 2 gene 3.7 kb deletion (-á2(3.7 kb) thal) along with demographic and clinical data were investigated in SCA outpatients (n = 125, 63 female and 62 male) in the Brazilian state of Bahia, which has a high prevalence SCA. PCR-RFLP showed that the Central African Republic/Benin (CAR/BEN, 51.2 percent) haplotype was most frequent, followed by the Benin/Benin (Ben/Ben, 28.8 percent). At least one CAR haplotype was present in every outpatient with a history of cerebrovascular accident. The Cameroon (Cam), Senegal (Sen) and Arab-India haplotypes occurred in small numbers, as did atypical haplotypes. Fetal hemoglobin (HbF, percent) was unevenly distributed. Compared to those > 18 y, those aged < 18 y had had fewer erythrocyte transfusions and high HbF levels (12.3 percent ± 7.01 to 7.9 percent ± 4.36) but a higher frequency of spleen sequestration and pneumonia. Compared with normal á - genes carriers values, the outpatients with -á2(3.7 kb) thal (determined by PCR analysis) had significantly higher mean hemoglobin concentration (Hb) (8.3 ± 1.34 g/dL, p = 0.018) and packed cell volume (PCV = 27.1 percent ± 4.26, p = 0.019) but low mean corpuscular volume (MCV = 86.1 fL = 10-15 L ± 9.56, p = 0.0004) and mean corpuscular hemoglobin (MCH = 26.6 percent ± 4.60, p = 0.039).

Methylenetetrahydrofolate reductase polymorphisms in myeloid leukemia patients from Northeastern Brazil

Methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR: EC 1.5.1.20) polymorphisms are associated to acute lymphoid leukemia in different populations. We used the polymerase chain reaction and the restriction fragment length polymorphism method (PCR-RFLP) to investigate MTHFR C677T and A1298C polymorphism frequencies in 67 patients with chronic myeloid leukemia (CML), 27 with acute myeloid leukemia FAB subtype M3 (AML-M3) and 100 apparently healthy controls. The MTHFR mutant allele frequencies were as follows: CML = 17.2 percent for C677T, 21.6 percent for A1298C; AML-M3 = 22.2 percent for C677T, 24.1 percent for A1298C; and controls = 20.5 percent for C677T, 21 percent for A1298C. Taken together, our results provide evidence that MTHFR polymorphisms have no influence on the development of CML or AML-M3.

A novel c.197T -> A variant among Brazilian neonates with glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency

Glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD, EC 1.1.1.49) deficiency is the most common enzyme deficiency worldwide, causing a spectrum of diseases including neonatal hyperbilirubinemia and acute or chronic hemolysis. We used the methemoglobin reduction test and G6PD electrophoresis to screen 655 neonates (354 females and 301 males) for common G6PD mutations in the city of Salvador in the Northeastern Brazilian state Bahia and found that 66 (10.1 percent) were G6PD-deficient (41 females and 25 males). The 66 (10.1 percent) G6PD-deficient neonates were assessed for the c.376 A -> G (exon 5) and c.202 G -> A (exon 4) mutations using the polymerase chain reaction and restriction enzyme fragment length polymorphism (PCR-RFLP) analysis and the results validated by DNA sequencing. Of the 66 G6PD-deficient neonates investigated we found that 54 (81.8 percent) presented the c.376 A -> G (p.Asn126Asp) and c.202 G -> A (p.Val68Met) mutations, two (3 percent) had the c.376 A -> G mutation only, two (3 percent) had the c.202 G -> A mutation only, five (7.6 percent) exhibited a previously unrecorded 197T -> A (p.Phe66Thr) substitution in exon 4 and three showed no mutations at any of these sites. Of the five neonates exhibiting the new 197T -> A (p.Phe66Thr) substitution, four (6.1 percent) also presented the c.202 G -> A and c.376 A -> G mutations and one (1.5 percent) had the c.[197T -> A / 202 G -> A] combination. We propose to name the new variant G6PD Bahia.

Polymorphisms in the glutathione S-transferase theta and mu genes and susceptibility to myeloid leukemia in Brazilian patients

The null genotype for glutathione S-transferase (GST, EC 2.5.1.18) gene polymorphisms is considered a risk factor for leukemia in different populations. In this work we investigated the GSTT1 and GSTM1 polymorphisms using multiplex PCR in 53 patients with chronic myeloid leukemia (CML), 23 with acute promyelocytic leukemia (APL) and 304 apparently healthy controls. In this association study we found that the GSTT1null genotype was more frequent in our group of APL patients than in the control group [OR = 2.75 (95 percent CI = 1.10-6.88)], providing evidence that a deletion in the GSTT1 gene could be a risk factor for this type of leukemia.

Clinical, hematological, and molecular characterization of sickle cell anemia pediatric patients from two different cities in Brazil

O objetivo desse estudo foi avaliar aspectos clínicos, hematológicos e moleculares de pacientes pediátricos portadores de anemia falciforme em duas cidades brasileiras: Salvador e São Paulo. Foram estudados 71 pacientes com idades variando entre 3 a 18 anos, analisando-se os seguintes aspectos: perfis hematológicos, haplótipos dos genes da globina b, presença de talassemia a-23.7kb, número de internações por vaso-oclusão, infecção, presença de acidente vascular cerebral e litíase biliar. O genótipo Ben/CAR predominou nas duas cidades. Talassemia a-23.7kb teve freqüência de 28,2 por cento em Salvador e 22,5 por cento em São Paulo. Os pacientes de São Paulo apresentaram um número maior de internações por vaso-oclusão nos diferentes genótipos. Esses dados sugeriram um fenótipo com menor gravidade clínica nos pacientes de Salvador, possivelmente relacionados a fatores genéticos, ambientais e sócio-econômicos. Estudos adicionais necessitam ser realizados com intuito de elucidar os efeitos moduladores na expressão gênica da doença.

Hemoglobinopathies in newborns from Salvador, Bahia, Northeast Brazil

Hemoglobinopatias são alterações hereditárias na molécula de hemoglobina com prevalência mundial elevada. O Brasil apresenta prevalência de 0,1 a 0,3por cento para recém-nascidos com anemia falciforme e freqüência de 20,0 a 25,0 por cento para a ocorrência de heterozigotos da talassemia alfa sobrescrito 2 entre indivíduos afro-descendentes. O presente estudo investigou a presença de hemoglobinas variantes e talassemia alfa 2 subscrito 2 sobrescrito 3.7kb e alfa subscrito 2 sobrescrito 4.2Kb em recém-nascidos de Salvador, Bahia, Brasil. Analisamos o sangue do cordão umbilical de 590 recém-nascidos, sendo 57 (9,8 por cento) com padrão FAS; 36 (6,5 por cento) FAC; um (0,2 por cento) SF e cinco (0,9 por cento) FSC. Cento e catorze (22,2 por cento) apresentaram talassemia alfa 2 subscrito 2 sobrescrito 3.7kb, dos quais 101 (19,7 por cento) foram heterozigotos e 13 (2,5 por cento) homozigotos, mostrando significância estatística para os dados hematológicos entre recém-nascidos com genes a normais e portadores de talassemia alfa 2 subscrito 2 sobrescrito 3.7kb. A talassemia alfa subscrito 2 sobrescrito 4.2Kb não foi encontrada. As freqüências descritas neste trabalho confirmam que as hemoglobinopatias são um problema de Saúde Pública no Brasil, enfatizando a importância dos programas de triagem neonatal e aconselhamento genético.

C677T polymorphism of the MTHFR gene and variant hemoglobins: a study in newborns from Salvador, Bahia, Brazil

O polimorfismo C677T no gene da MTHFR tem sido associado ao aumento dos níveis séricos de homocisteína.total (tHcy), descrito como fator de risco para o desenvolvimento de doenças cardiovasculares. Oitocentos e quarenta e três recém-nascidos (RNs), de duas maternidades diferentes, uma pública e a outra privada, em Salvador, Bahia, Brasil foram triados para o polimorfismo C677T por PCR e RFLP. A freqüência do alelo T foi de 0,23 e as prevalências dos genótipos C/T e T/T foram de 36,2 por cento e 5,3 por cento, respectivamente. A freqüência do alelo T diferiu e a prevalência do genótipo T/T foi mais elevada entre os RNs da maternidade privada. O perfil de hemoglobinas (Hb) foi determinado por HPLC em 763 RNs. A freqüência de Hbs variantes foi mais elevada entre os RNs da maternidade pública Tsylla Balbino do que na maternidade privada do Hospital Santo Amaro. A associação do polimorfismo C677T e o perfil de Hbs foram estudados em 683 RNs, apresentando freqüência elevada da coexistência do alelo T e Hb variantes. Estes resultados podem ser utilizados como base para estudos futuros sobre riscos potenciais de eventos vaso-oclusivos nestes indivíduos.